首頁 食品安全快速檢測 乳及乳制品 生物素(維生素 B7 )檢測試劑盒

生物素(維生素 B7 )檢測試劑盒

檢測項目:營養成分

適用樣本:乳粉

規格
96T/盒
產品介紹
概述

適用于奶粉中添加生物素(維生素 B7)含量的定量分析。 該試劑盒可進行 96 次測定。

檢測步驟

1、標準品配制?

1) 打開無菌水瓶蓋:沿著箭頭方向向上推開藍色蓋帽,逆時 針拉開鋁塑蓋,取下整個蓋帽,然后打開瓶塞,將瓶塞內 側朝上放置。?

2) 打開生物素標準品瓶蓋,取 x mL 無菌水加入標準品瓶中 (x 值見標準品瓶包裝標簽),蓋上瓶蓋,振蕩使標準品 充分溶解,即為標準品工作液。

3) 取 6 個無菌管(1.5 或 2.0mL),將標準品工作液按照下 表進行稀釋。標準品必須現配現用。 標準曲線 μg/100g 無菌水 (μL) 標準品工作 液(μL) 總體積 (μL) 空白:0 500 + 0 = 500 標準品 1:0.08 480 + 20 = 500 標準品 2:0.24 440 + 60 = 500 標準品 3:0.4 400 + 100 = 500 標準品 4:0.56 360 + 140 = 500 標準品 5:0.72 320 + 180 = 500 *標注曲線中已經包含樣品 40 倍的提取稀釋倍數。?

2、檢測培養基的配制?

1) 打開培養基瓶蓋,用無菌鑷子取出干燥劑并丟棄。?

2) 將 10mL 無菌水(必須取自試劑盒中)加入生物素檢測培 養基瓶中,蓋緊瓶蓋,振蕩混勻。?

3) 保證瓶蓋密閉的前體下,95℃水浴加熱 5min,然后快速 冷卻至室溫(低于 30℃)。?

4) 使用 0.22μm 無菌濾膜過濾全部培養基,用 15mL 無菌離 心管收集全部濾液。?

5) 取出凍干菌株,沿著箭頭方向向上推開藍色蓋帽,逆時 針拉開鋁塑蓋,取下整個蓋帽,輕輕打開瓶塞,將瓶塞 內側朝上放置;向菌株瓶內加入 1mL 無菌水(必須取自 試劑盒中),用移液槍吹打混勻,取其中的 Y mL(Y 值 見菌株包裝瓶標簽)加入過濾后的培養基中,振蕩混勻, 即為檢測菌液(檢測菌液須現配現用)。 注:如果培養基在處理的過程中出現較大體積的損失時, 加入的凍干菌株體積需要做相應比例的調整。為杜絕實驗室污 染,菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封,及時清理出實驗室或者 高壓滅菌處理;制備的檢測菌液如有剩余,也需要及時清理出 實驗室或者高壓滅菌處理。?

3、檢測步驟?

注:加入微孔板中的樣品必須為無菌樣品(使用試劑盒中 提供的無菌水進行稀釋)。?

1) 取出所需數量的微孔條置于微孔架上,將剩余微孔板條 放回鋁箔袋中密封,2-8℃儲存。?

2) 依次將 140μL 標準品或樣品、140μL 檢測菌液加入微孔 中(用標準品或樣品溶液潤洗槍頭),然后用粘膠薄膜蓋 好微孔條(揭開粘膠薄膜的保護層,用手或壓舌板將粘膠 薄膜壓平,使其充分封閉微孔板條)。 注:保證粘膠薄膜和微孔的封閉性,特別注意微孔的邊緣 部分。?

3) 在 37℃培養箱中避光孵育 44-48 小時。?

4) 輕輕來回顛倒混勻微孔板,使菌液充分混勻,然后用一 只手將微孔條固定于微孔架上,另一只手自右上方沿對 角揭開粘膠薄膜,靜置 2min 待氣泡全部消去(較難消去 的小氣泡用移液槍吸出)后用酶標儀在 610-630nm 或540-550nm 下測量渾濁度。 注:孵育完成后,微孔板可在冰箱中保存的最長時間為 48h,然后用酶標儀讀數。

注意事項
1) 試劑盒應在 2-8℃儲存,產品過期后請勿使用。 2) 加入微孔板中的樣品必須無菌,樣品稀釋時必須使用試 劑盒中提供的無菌水。樣品提取后必須在無菌的環境中進 行操作,且實驗中需要的其他耗材也必須無菌。 3) 檢測培養基會刺激眼睛、皮膚和黏膜,應小心使用。 4) 試驗完成后必須按照規章對微孔條進行處理(如高壓滅 菌)。 5) 為確定樣品中是否存在抑制因素,應進行回收率測定。 提取之前,向樣品中加入已知濃度的生物素溶液,回收率 應約為 80-120%。當回收率較低時,表明存在抑制因素, 應增加樣品稀釋倍數以消除抑制因素的影響。
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